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從專業角度帶您了解HPLC液相色譜儀具體操作步驟

發布時間:2020-01-14        閱讀:1129
   HPLC液相色譜儀是應用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。它由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中做相對運動時,經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。HPLC廣泛應用于生命科學、食品科學、藥物研究以及環境研究中。
 

  HPLC液相色譜儀的主要操作步驟:
  1、過濾流動相,根據需要選擇不同的濾膜。
  2、對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
  3、打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,連接檢測系統。
  4、進入HPLC控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。
  5、有一段時間沒用,或者換了新的流動相,需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進樣閥,需要在manual菜單下,先點擊purge,再點擊start,沖洗時速度不要超過10ml/min。
  6、調節流量,初次使用新的流動相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過2000。點擊injure,選用合適的流速,點擊on,走基線,觀察基線的情況。
  7、設計走樣方法。點擊file,選取selectusersandmethods,可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法,點擊newmethod。選取需要的配件,包括進樣閥,泵,檢測器等,根據需要而不同。選完后,點擊protocol。
  一個完整的走樣方法需要包括:
  a、進樣前的穩流,一般2-5分鐘;
  b、基線歸零;
  c、進樣閥的loading-inject轉換;
  d、走樣時間,隨不同的樣品而不同。
  8、進樣和進樣后操作。選定走樣方法,點擊start。進樣,所有的樣品均需過濾。方法走完后,點擊postrun,可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。
  9、關機時,先關計算機,再關液相色譜。
  10、填寫登記本,由負責人簽字。

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